(一)抗核抗体测定
广义的抗核抗体(antinuclearantibody,ANA)的靶抗原不再局限于细胞核内，而是扩展到整个细胞成分,包括细胞核和细胞质。经典的ANA是指针对真核细胞核成分的自身抗体的总称。
ANA的类型主要是IgG,也有IgM.IgA。这种抗体无器官和种族的特异性。
检测方法为间接免疫荧光法(indiretimmunofluorescenceIF)。以Hep-细胞和鼠肝作抗原,固定于载玻片上,与受检者血清反应。血清中抗体与抗原结合,再加入FITC标记的抗人Ig.在荧光显微镜下可观察到ANA的荧光强度和荧光模型。
抗核抗体的荧光模型主要包括:
1.核均质型与抗dsDNA、抗组蛋白和核小体抗体有关。
.核膜型主要有抗核孔复合物和抗板层素两种抗体。
3.颗粒型与抗U1RNP抗Sm，抗SSA抗SSB等抗体有关。
4.核点型
(1)少核点型:即p80盘曲蛋白抗体。
()多核点型:即Sp抗体。
5.着丝点型与抗着丝点抗体有关。
6.核仁型与针对核糖体,U3-RNP.RNA聚合酶的抗体.抗Scl-70抗体PM-Scl抗体、抗原纤维蛋白抗体有关。
细胞周期相关蛋白与增殖细胞核抗原有关;胞质抗体与抗线粒体抗体抗高尔基体抗体、抗溶酶体抗体、抗肌动蛋白抗体、抗Jo-1抗体等有关
(二)可提取性核抗原抗体谱测定
可提取的核抗原(extractablenmuclearantigens,ENA)由多种相对分子质量不同的多肽构成,即双链DNA,Sm核糖体、Scl-70(Sclerosis-70)、Jo-1、SSB(SjgenB)、SSA(SjogrenA)和RNP等。利用免疫印迹试验可以对这些抗原的自身(抗ENA)抗体进行检测,用来反映某些自身免疫病的状况不同的抗核抗体对应的Hep-细胞的荧光核型特点及临床意义见表4-8-4。不同的抗核抗体荧光核型图片见图4-8-1~图4-8-7。
(三)抗DNA抗体测定
抗DNA抗体(anti-DNAantibody)分为抗双链DNA(doublestrandedDNA,dsDNA)抗体、抗单链DNA(singlestrandedDNA,ssDNA)和抗ZDNA抗体。抗dsDNA抗体的靶抗原是细胞核中DNA的双螺旋结构,它的检测有临床重要性。检测抗dsDNA抗体最特异和最敏感的方法是用马疫锥虫或绿蝇短膜虫作为抗原基质进行间接免疫荧光测定。
结果判定
短膜虫动基体均质性着色,核浆呈弱均质性着色为阳性。
临床意义
1.抗dsDNA抗体阳性见于活动期SLE,阳性率为70%~90%。本试验特异性较高,但敏感性较低。目前认为,能结合补体的抗dsDNA抗体,在SLE特别是并发狼疮性肾炎患者的发病机制中起重要作用。其他风湿病中抗dsDNA也可阳性。
.抗ssDNA抗体阳性见于SLE(阳性率70%-95%),尤其是合并有狼疮性肾炎。还可见于一些重叠结缔组织病、药物诱导的狼疮和慢性活动性肝炎等,但不具特异性。
(四)抗胞质抗体测定
1.抗线粒体抗体(anti-mitochondrialantibodies,AMA)测定抗线粒体抗体是一种针对细胞质中线粒体内膜和外膜蛋白成分的自身抗体,无器官和种属特异性，该抗体主要是IgG。常用大白鼠胃或肾髓质和Hep-细胞作抗原基质进行免疫荧光法测定。AMA已发现9种亚型(M1-M9)。
结果判定
Hep-细胞胞质内泥沙样颗粒型着染。肾近曲.远曲小管细胞的特点是颗粒聚集成团。M3、M6在近曲小管荧光强。肝细胞胞质内均匀着染,胃壁细胞质着染(荧光图片见图4-8-8a~图4-8-8e)。
临床意义
许多肝脏疾病时可检出AMA。其阳性率在原发性胆汁性肝硬化(PBC)无症状者为90.5%，有症状患者为9.5%;慢性活动性肝炎可高达90%以上;但是,胆总管阻塞和肝外胆管阻塞为阴性。AMA可作为原发性胆汁性肝硬化和肝外胆道阻塞性肝硬化症的鉴别诊断。此外,慢性活动性肝炎和门脉性肝硬化阳性率为5%。药物引起的自身免疫病为M3和M6。
.抗肌动蛋白抗体检测该抗体有几种不同的抗原包括肌动蛋白、非肌球蛋白的重链、原ke肌球蛋白。当肌动蛋白抗体单独存在时,有时可在胞质中观察到无数束状纤维结构,有时延伸到细胞核。
结果判定
Hep-细胞胞质内有密集纤维状着染,但不形成网状。胃平滑肌高度着染。肾小球基质细胞着染,肾小管上皮细胞基底部及肾小管的刷状缘着染。肝多角型着染,抗原肌球蛋白或抗a-肌动蛋白抗体,肝细胞胞质内的纤维成片状着染(荧光图片见图4-8-9)。
临床意义
抗肌动蛋白抗体见于各种慢性肝脏疾病、肝硬化、原发性胆汁性肝硬化、I型自身免疫性肝炎,也见于重症肌无力、克罗恩病、长期血液透析。I型自身免疫性肝炎60%~90%有IgG型抗肌动球蛋白抗体,且效价高。
3.抗Jo-1抗体检测靶抗原是组氨酰-IRNA合成酶。其生理功能是催化tRNA接上组氨酸。Jo-1抗体主要是IgG1型抗体。
结果判定
Hep-细胞胞质有斑点状荧光颗粒,细胞核的核浆也显示明显的斑点状颗粒。分裂期细胞在染色质周围呈散在的细颗粒(荧光图片见图4-8-10)。
临床意义
Jo-1抗体对肌炎伴间质性肺纤维化有高度特异性,抗体的效价与疾病的活动性相关。多发性肌炎、Jo-1抗体阳性及HLA-DR/-DRw5标志称为"Jo-1综合征”。其他胞质抗体图片见图4-8-11一图4-8-13。
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