由中国医师协会风湿免疫科医师分会自身抗体检测专业委员会牵头组织，医院风湿免疫科胡朝*，温州医院检验科周仁芳等8位自身抗体检测一线专家执笔，风湿免疫科、肾内科、健康体检中心、风湿免疫科专科实验室、临床实验室及第三方检测中心等多学科、多科室30余位专家讨论、审议通过的“抗核抗体检测的临床应用专家共识”于年4月正式发表于《中华检验杂志》（年4月第41卷第4期，-）。
◆目的◆本共识从抗核抗体（ANA）的定义、ANA检测的临床应用范围、ANA检测方法、IIF-ANA荧光模型分类、命名、ANA检测结果报告和临床意义及解读等六方面对ANA检测的临床应用进行了讨论并形成15条建议，旨在提高我国临床实验室对ANA检测的临床应用范围、临床意义解读等方面的认识水平，规范我国ANA检测方法、结果判断及结果报告，为临床提供规范可靠的ANA检测结果，以及ANA检测临床意义的正确理解和合理解释。
●建议1●ANA定义：以真核细胞的各种成分为靶抗原的自身抗体总称。
本条建议明确ANA的范畴不仅包含抗细胞核抗原成分，还包括抗细胞浆、细胞骨架及细胞分裂周期蛋白等成分，本建议目的在于说明以前仅针对细胞核成分的ANA术语概念已经落后并且容易引起混淆，不能完全涵盖相关自身抗体。目前在有关ANA检测的国内外专家建议指南中，均指出ANA是以细胞的各种成分为靶抗原的自身抗体总称（anticellularantibodies）。其目的在于强调重视抗细胞浆型等ANA的重要临床意义，因为临床很多重要的ANA靶抗原存在于细胞浆中，如肌炎相关抗体，以及被列为一级必报核型的棒环型（RR）。但由于大部分学术著作、教科书、诊治指南及疾病诊断标准等仍采用传统的ANA定义，所以此ANA定义被广泛接受仍需要一段时间的适应过程。
◆建议2◆推荐临床疑似AID患者，特别是多器官受累的系统性（非器官特异性）AID患者检测ANA及其针对靶抗原的特异性自身抗体。
本建议是对临床上ANA及其针对靶抗原的特异性自身抗体是否需要同时检测进行规范。由于单独检测IIF-ANA可导致10%以上的患者ANA假阴性，容易造成部分具有重要临床意义的ANAs特异性抗体漏检，导致AID患者的误诊、漏诊；单独ANAs特异性抗体直接代替针对IIF-ANA总抗体会造成13%以上的患者ANA假阴性结果，导致AID患者的漏诊[间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的相互关系.中华临床免疫和变态反应杂志，，9（5）：-。]。因此该共识建议强调临床疑似AID患者，特别是多器官受累的系统性（非器官特异性）AID患者应检测ANA及其针对靶抗原的特异性自身抗体。
◆建议3◆ANA检测可用于高危人群的健康体检筛查，如育龄期女性、AID患者的直系亲属、处于易诱发AID的环境及免疫功能异常者等。
本建议是对ANA检测应用领域的扩展。ANA是自身免疫病的重要血清标志物，以前主要用于自身免疫病的诊断，部分靶抗原特异性自身抗体可用于病情评估。随着临床应用经验的积累，发现ANA及许多靶抗原特异性自身抗体可以在自身免疫病早期出现，可在患者典型临床症状前数年检测到，因此可以用于AID的筛选。特别是近年来在健康体检人群进行自身抗体检测的积累数据显示健康体检人群中ANA的异常率高达11.27%，特别是女性人群高达19.79%[体检人群中自身抗体筛查的临床意义。中华检验医学杂志,,37:-。]。因此与会临床专家强调将ANA及其靶抗原特异性自身抗体用于高危人群的健康体检筛查具有重要意义，这也是自身抗体临床应用从疾病诊断发展到疾病筛查，以及用于疾病预测、预警及预后判断的重要发展，与自身免疫病的诊疗理念从治病救人到提高患者生活质量的个性化早期治疗相符。
◆建议4◆推荐以HEp-2细胞为实验基质的IIF法是进行ANA检测的参考方法和首选方法。
本建议明确了ANA检测的参考方法和首选方法是IIF法。自年Frious建立间接免疫荧光法检测ANA（IIF-ANA），开创了ANA检测的里程碑。40多年前以HEp-2细胞为实验基质的IIF-ANA建立，使ANA对系统性AID诊断发生了革命性的变化。近些年，随着ANA检测的临床推广应用，经典的IIF-ANA受到其他检测方法学的挑战。发展了基于纯化抗原、重组抗原及人工合成肽，简单、快速、易自动化的酶法、化学发光法及免疫微球等检测方法。由于这些方法使用纯化或重组抗原检测ANA总抗体，存在纯化抗原过程中的抗原性“减弱”或“失活”，或重组抗原的决定簇缺乏部分天然的高级结构及无法完全重组全部抗原成分而导致假阴性等缺点。并且不同的方法学存在针对不同的抗原靶位，具有不同的敏感性和特异性，从而导致ANA检测标准化的缺乏和结果合理解释问题。而HEp-2细胞具有人源性、核抗原种类丰富、特异性强、含量高、核大、细胞结构清晰、易于结果观察及荧光染色模型分析，以及可以检测ANA总抗体，因此以HEp-2细胞为基质的IIF法仍然被美国风湿病学会(AmericanCollegeofRheumatology，ACR)、欧洲自身免疫标准化促进会(EuropeanAutoimmunityStandardizationInitiative，EASI)及国内的专业学会推荐为ANA检测的参考方法或首选方法。
◆建议5◆采用以HEp-2细胞为实验基质的IIF法进行ANA检测时，HEp-2细胞在实验基质中每显微镜视野（放大倍数为倍）应可见3~5个有丝分裂细胞；二抗应使用荧光素标记的抗人IgG抗体；IIF法检测ANA的稀释方法可根据不同的检测试剂而采用倍比稀释系统或稀释系统。
本建议对IIF-ANA检测的HEp-2细胞、荧光素标记二抗及稀释方法进行了要求。如采用以HEp-2细胞为实验基质的IIF进行ANA检测时，HEp-2细胞在实验基质中每显微镜视野（放大倍数为倍）应可见3~5个有丝分裂细胞。[SackU，ConradK，CsernokE，elal.AutoantibodydetectionusingindirectimmunofluorescenceonHEp-2cells.AnnNYAcadSci,9,:-73.]ANA可存在不同的亚型，而IgG亚型与AID密切相关。因此，IIF-ANA检测时的二抗应使用荧光素标记的抗人IgG抗体。另外，虽然国际上IIF-ANA的检测主要采用倍比稀释系统，但我国大多数实验室采用稀释系统，因此本共识建议IIF检测ANA的稀释方法应根据不同的检测试剂要求，通常采用倍比稀释系统或稀释系统。
◆建议6◆ANA特异性自身抗体可采用多种免疫学方法检测，不同的方法具有不同的临床应用优缺点。
本建议明确了ANA特异性自身抗体可采用多种免疫学方法检测，不同的检测方法具有不同的临床应用优缺点。如ELISA具有高敏感性、定量及自动化，但需对每个自身抗体进行逐项检测。线性免疫印迹法（lineimmunoassay,LIA）具有高敏感性、易操作、自动化及一次实验操作可同时检测多种自身抗体，但其检测结果为半定量，某些自身抗体的特异性偏低。化学发光免疫分析（chemiluminescenceimmunoassay,CLIA）具有高敏感性、高特异性、定量及自动化，但检测成本高、需对每个自身抗体进行逐项检测。我国从事自身抗体检测的实验室众多，而且实验室人员设备配备以及受各地检测收费不同等现状的制约，各实验室应根据具体情况采用最适合的检测方法进行ANA特异性自身抗体的检测。
◆建议7◆抗ds-DNA抗体检测使用绿蝇短膜虫为实验基质的IIF法、ELISA和放射免疫法。若其他方法检测抗ds-DNA抗体阳性与临床表现不符合时，建议采用IIF法或放射免疫法进行进一步确认。对SLE的疾病活动性进行监测时，应定期使用同种定量检测方法进行抗ds-DNA抗体的检测。
由于抗双链DNA(doublestrandedDNA,ds-DNA)不同检测方法的试剂中包被靶抗原的特异性、稳定性因素，以及针对抗ds-DNA抗体亲合力的差异，抗ds-DNA抗体不同检测方法具有不同的临床意义。对此，本共识建议抗ds-DNA抗体检测可使用绿蝇短膜虫为实验基质的IIF、ELISA和放射免疫法（Farr法）。由于IIF和Farr法具有较高的临床特异性，若出现其他方法检测抗dsDNA抗体阳性与临床表现不符合时，建议采用IIF或Farr法进行进一步确认。考虑到不同检测方法学间上述所提及的差异，建议对SLE的疾病活动性进行监测时，应定期使用同种定量检测方法进行抗dsDNA抗体的检测。
◆建议8◆在ANA的临床应用中可先用IIF法进行ANA检测，若结果阳性，需进一步进行ANA针对靶抗原的特异性自身抗体检测。当临床高度疑诊时，不论ANA总抗体的检测结果如何，都需要对针对靶抗原的特异性自身抗体进行检测。
本建议明确了ANA总抗体和针对靶抗原的特异性自身抗体检测的程序性。ANA检测分成ANA总抗体的检测和针对靶抗原的特异性自身抗体检测。通常在ANA的临床应用中可先用IIF进行ANA检测，若结果为阳性，需进一步进行ANA针对靶抗原的特异性自身抗体检测，为疾病确诊提供依据。但由于不同方法存在靶抗原表位、敏感性及特异性差异，造成ANA总抗体的检测和针对靶抗原的特异性自身抗体检测结果的不一致性。如临床检测中存在IIF-ANA阳性而针对靶抗原的特异性自身抗体检测结果阴性，甚至IIF-ANA阴性而针对靶抗原的特异性自身抗体检测结果阳性的情况。因此，当临床高度疑诊AID时，不论ANA总抗体的检测结果如何，都需要对针对靶抗原的特异性自身抗体进行检测。例如，临床疑似炎症性肌病（IM）需检测抗Jo-1抗体。
◆建议9◆IIF-ANA荧光模型分为3类：细胞核荧光模型（14种）、细胞浆荧光模型（9种）和细胞有丝分裂荧光模型（5种）。必报荧光模型包括：细胞核均质型、细胞核斑点型(需区分细胞核致密斑点型)、着丝点型、核点型、核仁型、细胞浆纤维型、细胞浆颗粒型、细胞浆网状/线粒体型、细胞浆极型/高尔基体型、细胞浆棒环状型、核膜型和细胞浆线性/肌动蛋白型。
目前，根据ICAP提出的关于ANA荧光模型分类、命名共识[ChanEK，DamoiseauxJ，CarballoOG，elal.ReportoftheFirstInternationalConsensusonStandardizedNomenclatureofAntinuclearAntibodyHEp-2CellPatterns-[J].FrontImmunol,,6:.]，IIF-ANA荧光模型分为3类：细胞核荧光模型（14种）、细胞浆荧光模型（9种）和细胞有丝分裂荧光模型（5种），所有荧光模型都赋予一个唯一AC(anti-cell)开头的编码。为确保具有重要临床意义的荧光模型被准确识别（如细胞核致密斑点型），以及荧光模型判读难易程度不同，将ANA荧光模型分为必报荧光模型和选报荧光模型。基于ANA的国际分类和命名原则，结合国内ANA检测的临床实践现状。如核膜型和细胞浆线性/肌动蛋白型作为自身免疫性肝病的重要自身抗体，而且自身免疫性肝病在中国的发病率较高，核膜型和细胞浆线性/肌动蛋白型在临床检测中常见；同时这两种核型容易辨认，我国从事自身抗体检测的专业人员能对这两种核型有正确的识别能力。因此将核膜型和细胞浆线性/肌动蛋白型这两种易判读且具有重要临床意义的ANA纳入必报荧光模型。必报荧光模型13种包括：细胞核均质型、细胞核斑点型(需区分细胞核致密斑点型)、着丝点型、核点型、核仁型、细胞浆纤维型、细胞浆颗粒型、细胞浆网状/线粒体型、细胞浆极型/高尔基体型、细胞浆棒环状型、核膜型和细胞浆线性/肌动蛋白型，选报荧光模型15种。
◆建议10◆IIF-ANA检测结果报告应包括：检测方法、定性结果（阳性/阴性）、荧光模型、滴度及必要的临床建议。对于混合荧光模型，荧光模型的报告优先级顺序为细胞核荧光模型、细胞浆荧光模型、细胞有丝分裂期荧光模型。相同优先级的荧光模型，建议按滴度高低顺序依次报告。
本建议规范了IIF-ANA的检测结果报告，根据第2届ICAP达成的共识[DamoiseauxJ，vonMuhlenCA，Garcia-DeLaTorreI，elal.InternationalconsensusonANApatterns(ICAP):thebumpyroadtowardsaconsensusonreportingANAresults[J].AutoImmunHighlights,,7(1):1.]，以及我国ANA检测的临床实践现状，IIF-ANA检测结果报告应包括：检测方法、定性结果（阳性/阴性）、荧光模型、滴度及必要的临床建议。对于混合荧光模型，荧光模型的报告优先级顺序为细胞核荧光模型、细胞浆荧光模型、细胞有丝分裂期荧光模型。相同优先级的荧光模型，建议按滴度高低顺序依次报告。基于ANA的最新定义，建议将HEp-2细胞单独胞浆荧光模型及细胞有丝分裂期荧光模型纳入ANA阳性结果。
◆建议11◆IIF-ANA检测结果判读及报告人员应有培训、考核及定期进行结果判读比对。
由于IIF-ANA检测具有较高的专业性和一定的难度，为保证IIF-ANA检测结果的准确性，本建议对IIF-ANA检测结果判读及报告人员提出要求：从事此项工作的技术主管应有专业技术培训（如专业学会组织的培训、进修学习等）及考核合格记录（如考核认证的合格证及岗位培训证等），其他从事此项工作的技术人员也应有定期培训的考核记录，应定期进行人员间结果判读比对。
◆建议12◆采用ELISA等其他检测方法的ANA检测结果应包括检测结果的定量数值和单位、参考区间及必要的临床建议。
本建议对ELISA等其他检测方法的ANA检测结果报告进行了规范，此类方法在ANA检测结果报告中，应包括检测结果的定量数值和单位、参考区间及必要的临床建议。
◆建议13◆ANA针对靶抗原的特异性自身抗体检测结果报告应包括检测方法、定性结果（若为定量检测方法应包含定量数值和单位）及参考区间，同时应包括必要的临床建议。
本建议规范了ANA特异性自身抗体检测结果报告，在此些自身抗体检测结果报告中应包括检测方法、定性结果（若为定量检测方法应包含定量数值和单位）及参考区间，同时应包括必要的临床建议。
◆建议14◆荧光模型对进行下一步针对靶抗原的特异性自身抗体的检测具有一定的指导意义，但并非完全一致，不能仅从荧光模型来推断针对靶抗原的特异性自身抗体或AID。
本建议明确了IIF-ANA荧光模型的临床意义，荧光模型是IIF检测ANA结果的重要检测参数，与其针对的靶抗原在细胞内分布相关，对进行下一步特异性自身抗体的检测具有一定的指导意义，并与某些特异性自身抗体或AID的特殊临床表现存在一定的相关性。但并非严格意义上的完全一致，不能仅从荧光模型来推断特异性自身抗体。如细胞核均质型的ANA荧光模型可能对应的是抗双链DNA抗体，但抗双链DNA抗体并不一定局限于细胞核均质型的荧光模型，同样细胞核均质型的荧光模型也并非一定为抗双链DNA抗体或见于SLE患者。[ServaisG,KarmaliR,GuillaumeMP,etal.AntiDNAantibodiesarenotrestrictedtoaspecificpatternoffluorescenceonHEp2cells.ClinChemLabMed,9,47(5):-.]。
◆建议15◆不推荐使用ANA滴度（量值）的变化来反映AID的活动性和疗效反应性。不同厂家试剂可采用不同的滴度（量值）系统，不同滴度系统不能直接进行滴度值的比较，但部分检测项目可溯源到国际单位（IU/ml）后进行比较。
本建议明确了关于ANA滴度的常见问题。由于ANA滴度与病情严重性没有必然联系，因此，不推荐使用ANA滴度的变化来反映AID的活动性和疗效反应性。但对于某些ANA特异性自身抗体，如抗双链DNA抗体滴度可作为SLE疾病活动性的监测指标之一，应定期进行监测。另外，由于以HEp-2细胞为实验基质的IIF-ANA，不同厂商的检测试剂的敏感性和特异性存在差异，因此其稀释滴度系统也存在不同。目前国际上诸多实验室常采用1:40、1:80、1:、1:等的倍比稀释滴度系统，但国内常采用1:、1:、1:0、1:3等为因子的稀释滴度系统。虽然上述稀释系统均有1:存在，但两者的临床意义差别较大，不能直接比较。
◆参考文献◆中国医师协会风湿免疫科医师分会自身抗体检测专业委员会。抗核抗体检测的临床应用专家共识。中华检验杂志,,41（4）:-.
通信作者：曾小峰，
电子信箱：zengxfpumc
.